木质素含量、总量测定-（5大方法）

一、硫酸法

测定植物中的木质素含量，直观的方法是硫酸法（Klason法）。

测定原理是利用浓硫酸水解样品中的非木质素部分，剩下的残渣即为木质素。

硫酸法的操作为准确称取1g木粉，用滤纸包好，在索氏抽提器中用乙醇-苯(1；2)混合液脱脂6-8h含单宁多的样品先用95%乙醇抽提4h再脱脂。脱脂后的样品风干，移入100mL的烧杯中，在约20癈下加入72%的硫酸15mL搅拌4h然后移入1000mL的三角瓶中，用560mL蒸馏水稀释到硫酸浓度为3%装上回流冷凝管加热回流2h，冷却后在已恒重的玻璃砂芯漏斗(G4)真空滤出木质素，用热水洗涤至中性，于(105±3)°C下干燥至恒重，称量，即可计算出木质素的含量。

这种方法并不太准，因为有少量的木质素溶解于硫酸。

此外，这种方法只适合硬木木质素的测定，不适合软木木质素、草本木质素及一年生植物木质素含量的测定，因为这些植物体内不明确的蛋白质和矿物质会对木质素测定产生干扰。如果将干燥恒重后的木质素放入高温电炉中550°C灼烧灰化至恒重，按下式计算则可获得比较准确的测定结果：

木质素(%)=[(G₁-G)-G₂]X100X100/[G₃(100-W)]

式中，G为滤纸的质量，g；G₁为烘干后的滤纸连同残渣质量，g；G₂为风干样品质量，g；G₃为灰分质量，g；W为样品水分，%.

 

二、酸性洗涤纤维法

酸性洗涤纤维法（ADF法）可用于草本植物或一年生植物木质素的测定。

其操作方法为首先将样品洗净、烘干、粉碎、称量（质量为W₁），再用蛋白酶对植物样品进行预处理，水解掉其中的蛋白质，其次加入硫酸至硫酸浓度达到72%回流2h冷却、过滤、洗涤、干燥至恒重，得到酸不溶的木质素，称量（质量为W₂）最后灼烧，称量灰烬（质量为W₃），按下式计算木质素的含量：

木质素（%）=（W₂一W₃）X100/W₁

 

三、乙酰溴法

此法有可能代替硫酸法用来测定木质素的总量。

乙酰溴法(AB法)的操作方法为：

称取10-25mg 80目的脱脂木粉，装入150mm×19mm的带栓试管中，试管栓上有可通气的小孔，加入10mL新蒸馅的乙酰溴(加入冰醋酸使其浓度为25%)后加盖，充分振摇，在(70±0.1)°C恒温槽中放置30min并每隔10min振摇1次，然后立即将试管放入15°C水中冷却。另外，在200mL的容量瓶中加入2mol/L氢氧化钠溶液9mL冰醋酸50mL将试管中的反应物倒入容量瓶中，并用少量冰醋酸冲洗，再加1mL7.5mol/L的盐酸羟胺溶液，边冷却边摇动，用冰醋酸稀释至刻度，5min内在紫外-可见分光光度计±280nm处测定吸光度，按下式计算木质素的含量：

木质素(%)=100V(A_a-A_b)/aW

式中，A_a为样品吸光度；A_b为参比吸光度(参比吸光度必须在0.01以下)；V为溶液量，L；W为样品质量，g；a为木质素的吸光系数，L/(g•cm)。

在反应过程中会有木聚糖降解，降解产物在280nm处也有吸收，干扰测定结果。Fukushima和Hatfield提出在样品加入到乙酰溴的冰醋酸溶液后，再加入用盐酸和二氧六环的混合溶液，这样可以更好地提取木质素，同时避免了干扰，测定结果比较理想，因此此法有可能代替硫酸法用来测定木质素的总量。

 

四、改进vanSoest法

此法可测定各种植物中木质素的含量。

取风干样品2-5g（粉碎，通过1mm筛孔）于锥形瓶中，加入100mL酸性洗涤剂（20g十六烷基三甲基溴化铵溶于1000mL1.00mol/L硫酸中），在5〜l0min内加热至沸腾，回流lh用套有尼龙绢纱的玻璃砂芯漏斗抽滤，然后转入已称量的坩蜗内，加入72%硫酸浸没内容物，搅拌成糊，在15°C下消化3h真空抽滤至干，热水多次洗涤至中性，置坩埚于100癈烘箱内烘至恒重，放在干燥器中冷却，称量。称量后将其于550癈高温电炉中灰化，称量，二者质量之差即烘干沉淀量与灰化之差，为酸不溶木质素质量。

 

 

五、紫外吸收光谱法

紫外吸收光谱法，操作简单，数据较精确，重复性良好，是现在普遍采用定量检测木质素的方法。

一般用木质素的特征吸收波长280nm来定量测定样品中木质素的含量。紫外吸收光谱法用于木质素磺酸盐的定量，具体方法如下。

1、测定波长的选择

配制一定浓度的木质素磺酸盐水溶液，在紫外-可见分光光度计上进行全波长扫描，得到的两个吸收峰分别出现在200-240nm和280nm附近。

由于200-240nm峰的测定要在极稀的溶液中进行，不易得到准确的结果，而280nm峰不会受到糖类的干扰，因此选择280nm测定吸收峰。

2、标准曲线的绘制

配制木质素磺酸钙标准品浓度分别为5mg/L、10mg/L、15mg/L、20mg/L、25mg/L、30mg/L、35mg/L、40mg/L、45mg/L、50mg/L的一组溶液。

将标准溶液加入石英比色皿中，以蒸馏水为参比溶液，在280nm处读取各种浓度溶液的吸光度A_o以木质素磺酸钙浓度为纵坐标，吸光度为横坐标，作标准曲线，并回归成直线方程。

3、样品的测定

将待测样品在105°C干燥至恒重，准确称取不超过5g的样品，溶于去离子水中，在1000mL的容量瓶中定容至刻度，然后用移液管准确吸取10mL，转移到另一个1OOOmL的容量瓶中，并定容至刻度，配制成含木质素磺酸钙为25-50mg/L的水溶液，与标准曲线同样操作测定其吸光度。

由样品溶液的吸光度在标准曲线上查出相应的木质素磺酸钙含量，计算出样品中木质素磺酸钙的含量。